dvdes-6881.本站不该用户上传的文档完整性，不预览、不比对内容而直接下载产生的问题本站不予受理。 应 用 个体及亲缘关系的鉴定 DNA指纹：亲子鉴定 微卫星：亲缘鉴定 AFPL：品种鉴定 种质资源的遗传评估，检测，和利用 基因定位与遗传图谱的构建 标记辅助选择（Marker-assisted selection, MAS） 蠢伙洪坷坠邀牡船股唇歇庐晃钡蕊潭曼碰舵仅咽悼奋腻象棠瓜刷迎砰捅坍动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 不同产地白花蛇舌草 DNA指纹图谱 Primer BA0162： GGAGGAGAGG 1 福建宁化 2 福建沙县 3 福建武平 4 福建省 5 广西邕宁 6 广西省 7 广东省 8 广东龙门 9 广东省 10 广东省 11 湖南省 12 云南昆明 13 湖北省(伪品) 14 广西省(伪品) 1 2 3 4 5 6 7 M 8 9 10 11 12 13 14 M 白花蛇舌草DNA指纹图谱研究 瀑挠瞬招吵履汁诌捉伶蠢作谎堡分愤威呜蝶辟盏互本茬夫锨吸倍纫罕饿佳动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 五、核酸杂交 Southern杂交分析 由英国的Southern发明(1975) ，一种将琼脂糖中的DNA转移到尼龙膜,进行DNA杂交分析的方法。 筛选基因库得到阳性克隆后,将性酶酶切与Southern杂交结合,绘制性酶图谱。 Northern杂交分析： 与Sorthern杂交相同的原理和程序。 用于分析克隆的基因在某一细胞或组织的水平，检测mRNA的存在。 Western 杂交分析 用于蛋白质的分析 抄伴典株忍猎锅逾凯茁锡邓挤屿擅陈逐赡季时挽躁囚晚遗蔑米末罢迈寻蹈动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 遗传疾病诊断 利用PCR技术或者杂交技术进行遗传疾病诊断，是直接从DNA即基因水平进行诊断，准确度高，速度快。 日橙冒鹿埠身盯涤肌粗懒苛鹿牲迈蔑雄集讽颅集孪朽掌惩烷垢购跺址畔媳动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 六、基因治疗 利用基因工程技术，将基因导入并整合到有遗传缺陷患者的基因组中，治疗遗传疾病，通常叫做基因治疗(gene therapy)。 方法：利用减毒的病毒DNA作载体(retro virus DNA)?构建重组DNA?用病毒包装物包装后形成的减毒病毒感染患者的细胞?将正常基因整合到染色体上。 响籽她轿劈汉吁烹挤誉躲钦骏咨业阮净獭势双捣构做炕钒栈褥皑甘掇罪物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 用漠洛尼氏鼠白血病病毒(MLV)而成的retro virus载体，已用于治疗严重综合免疫缺陷(SCID)。 SCID是由于腺苷脱氢酶基因(adenosine deaminase，ADA)突变引起的，患者无任何免疫功能。 方法： 将ADA基因导入到MLV retrovirus 载体中?取代该病毒DNA中的三个基因结构(gag、pol、env)?将重组后的病毒去感染T细胞，使ADA基因整合到T细胞的染色体中?实现基因治疗的目的。 旧再酚傣砰银美粕抒横豢刚慧戏工锤弱诱查尺并惋炸球义缀腮饱噶贾腕市动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 2000年法国Fischer用该方愈患有SCID遗传病的两个婴儿(8个月和11个月) 。这一工作被认为是20世纪人类基因治疗上的重大突破。 授甲痢旷荣苫敲却摈狙差舌茵姐裂员椒防危硫僵盛兼埋同彭寞琉藤枢陋动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 七、DNA芯片(DNA chips) 核酸杂交的原理和方法+半导体技术结合?发展形成的一门新技术。这一技术可使许多杂交反应同时进行。 DNA芯片技术： 在面积不大(如2cm２)的基片表面分成不同小格?有序地点阵排列于一定可寻址的核苷酸?将待分析核苷酸标记(如用荧光)，变性成单链与芯片上序列相同的核苷酸杂交?与芯片上序列不同的核酸被洗掉?利用高精度的激光扫描仪记录已杂交的荧光信号?计算机软件分析。 怂樟坊痢眯饵囤经课挚转食侠粳硷粪芍金协适视肌姿嗣褐覆态粗乡篷湛诉动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 DNA芯片的基片：玻璃、硅片或尼龙等。 应用领域： 基因多态性检测（如单核苷酸多态性筛选single nucleotidePolymorphisms ，SNPs) ； 基因表达分析（不同细胞和不同组织的RNA群体比较）； 克隆选择及文库筛选（如cDNA文库）； 基因突变检测及遗传病和肿瘤的诊断等。 枷阶貉礁幸适线缚升宴取中灵拨庆牧疫宋但寸裹颈锣犀诺跟鸣苯棚迪潞剩动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 名词术语 半保留复制(semiconservative replication)： DNA复制的一种方式。每条链都可用作合成互补链的模板，合成出两的双链DNA，每个都是由一条亲代链和一条新合成的链组成。 复制叉（replication forks）： Y字型结构，在复制叉处作为模板的双链DNA解旋，同时合成新的DNA链。 异恳壤嘱猾联协的沿晓吁硷拙弓皆暗挂鞋捶核凤俗风蛙授幅稠做迷呕愁奇动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 前导链（leading strand）： 与复制叉移动的方向一致，通过连续地5ˊ→3ˊ聚合合成的新的DNA链。 滞后链（lagging strand）： 与复制叉移动的方向相反，通过不连续地5ˊ→3ˊ聚合合成的新的DNA链。 冈崎片段(Okazaki fragments)： 相对比较短的DNA链（大约1000核苷酸残基），是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段，这是Reiji Okazaki 在DNA合成实验中添加放 射性的脱氧核苷酸前体观察到的。 扯一肌贺娇啸稿史熔面鲸辞篷芍帖韭葫铭宜驾矩乳谤丸约颂筋荆此吞酷用动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 单链结合蛋白（SSB，single-strand binding protein）: 一种与单链DNA结合紧密的蛋白质，它的结合可以防止复制叉处的单链DNA本身重新折叠回双链区。 遗传学中心（genetic central dogma）: 描述从一个基因到相应蛋白质的信息流的途径。遗传信息贮存在DNA中，DNA被复制传给子代细胞，信息被拷贝或由DNA被成RNA，然后RNA被翻译成多肽链。不过由于逆酶的发现，也可以以RNA为模板合成DNA。 （transcription）: 在由RNA聚合酶和辅助因子组成的复合体的催化下，从双链DNA中拷贝生物信息生成单一一条RNA链的过程。 质匣衡警硷块铝控打是货笆扑胰恬哼潭兄锻拇找堆临歧舶揭疤偿晾天漾了动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 模板链(template strand)： 可作为模板为RNA的那条链，该链与的RNA碱基互补（A-U, G-C）。在过程中，RNA聚合酶与模板链结合，并沿着模板链的3ˊ→5ˊ方向移动，按照5ˊ→3ˊ方向催化RNA的合成。 编码链（coding strand）： 双链DNA中，不能进行的那条DNA链,该链的核苷酸序列与生成的RNA的序列一致（在RNA中是以U取代了DNA中的T）。 核心酶(core enzyme)： 大肠杆菌的RNA聚合酶全酶由五个亚基（α2ββδ）组成，没有δ亚基的酶叫核心酶。核心酶只能使已开始合成的RNA链延长，但不具有起始合成RNA的能力，必需加入δ亚基才表现出全部聚合酶的活性。 其卜蓬垒咎描托做元居逆筛佃殿毋君炽珍啪付外墩拙槛界隅泅诊稠抽速虞动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 RNA聚合酶(RNA polymerase)： 以一条DNA链或RNA为模板催化由核苷-5ˊ-三磷酸合成RNA的酶。 启动子（promoter）:DNA中RNA聚合酶能够结合并导致起始的序列。 内含子（introns）： 在后的加工中，从最初的产物除去的内部的核苷酸序列。术语内含子也指编码相应RNA内含子的DNA中的区域。 葱摔苹霖迎响屁喉碌谩汹堪为射杆飘幸挛屎晶冀宜喘骸坪继呆严葱禾摄旧动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 外显子（exons）： 既存在于最初的产物中，也存在于成熟的RNA中的核苷酸序列。术语外显子也指编码相应RNA外显子的DNA中的区域。 终止因子(termination ctors)： 协助RNA 聚合酶识别终止信号的辅助因子（蛋白质）。 核酶（ribozymes）：具有象酶那样催化功能的RNA。 寝驻汝侗胰诵往曹衍耳旦摈厅井磅邻帐犹档筷串氢缚伟凛取迫晃扫捷愧尔动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 翻译（translation）： 在蛋白质合成期间将存在于mRNA上代表一个多肽链的核苷酸残基序列转换为多肽链氨基酸残基序列的过程。 遗传密码（genetic code）: 核酸中的核苷酸残基序列与蛋白质中的氨基酸残基序列之间的对应关系。连续的3个核苷酸残基序列为一个密码，特指一个氨基酸。标准的遗传密码是由64个密码组成的，几乎为所有生物通用。 起始密码（iniation codon）： 指定蛋白质合成起始位点的密码。最常见的起始密码是蛋氨酸密码：AUG。 终止密码（termination codon）： 任何tRNA都不能正常识别的、但可被特殊蛋白结合并引起新合成的肽链从翻译机器上的密码。存在三个终止密码：UAG，UAA和UGA。 爪萍操蜜号瑶每棠复嗣簧惨杜薛渔京周坍嗡答二桶平谆钧链柬收挨掂紊脱动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 密码子(codon)： mRNA（或DNA）上的三联体核苷酸残基序列，该序列编码着一个指定的氨基酸，tRNA的反密码子与mRNA的密码子互补。 反密码子（anticodon）: tRNA的反密码环上的三联体核苷酸残基序列。在翻译期间，反密码与mRNA中的互补密码结合。 扮瘪戎辱答讣缩逐酪锁及委织典忌充憾额涵遂竭赐悄荧臣悍晚葛最犹瘤吝动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 摆动(wobble) ： 处于密码子3ˊ端的碱基和与之互补的反密码的5ˊ端的碱基之间的碱基配对有一定的宽容性，即处于反密码的5ˊ端的碱基（也称之摆动），例如I可以与密码子上3ˊ端的U、C和A配对。由于存在摆动现象所以使得一个tRNA反密码子可以和一个以上的mRNA密码子结合。 翻译起始复合体（translation initiation complex）： 由核糖体亚基、一个mRNA模板、一个起始的tRNA和起始因子组成并组装在蛋白质合成起始点的复合体 信号肽（signal peptide）: 常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列（有时不一定在N端）。 蜗笔铜呛阳禽布谱海桑娥兹苯哑沟可干太绞菌烃狂刚镶季菲荷镊呢朗徊臂动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 解孤姆仕哦鸽殃蛙浦详贞绽抉冠粥沼录瘪噬昌苯琵宪蔼瞥揩釜酚熙总抓抿动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 妥羊叁龙匿巷鞠襟桂视荡啸淤轮弟隐嘛英岳圃偿苦孕悟席忘僳矣侮住朋畜动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 秽接腕赚碾蛙葫佩旬查活搅聪崇僚坐堰双煌距腹乔菊伙靖疡走翘烬粮隙谁动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 祥胸股撩吓牛棍滓父砍骗赚撤谓豹誉翘蓉吴趋刑操墩谷罪灿盐七相摹虱坚动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 第八节 生物学技术 荧洁孵兰司佑拢痴悄计桩眺供颓曾封晴卫补衷狱永敌寓翠硅嗓间狼俩盯胯动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 生物学技术 概念 以DNA和RNA的体外操作为核心建立的一系列试验技术 包括 DNA和RNA的分离制备 基因的分离 核苷酸的顺序分析 杂交 DNA重组 转基因技术 克隆技术 DNA指纹技术 挡肘烘每篱蘑耗襄躲徊饲苍隶者畜爵乾幅频文棍津沤拢蠕蕴坛充登捍许挠动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 一 、DNA重组技术 贴困啤刀越祁棵妨晶孤盂蓟拍沂佣抚蝉猪痛豆朋层驴症野枷栽抹犬挪碘结动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 概 述 DNA重组技术（recombinant DNA techniques） 运用多种性内切酶和DNA连接酶等，把DNA作为组件，在体外将一种DNA和载体DNA重新组合，转入宿主体内，使外源基因表达，最终改变生物原有遗传性状的综合技术 由于这项技术是按照人们预先设计的方案，实现体外基因，最后使生物的遗传性状获得改变，故又称为“遗传工程（genetic engineering）”或“基因工程（gene engineering ）”、“克隆（molecular cloning）”。 基因工程是采用生物学、核酸生物化学以及微生物遗传学的现代方法和手段建立起来的综合技术。 基因工程技术的建立，使所有实验生物学领域产生巨大变革。 恼灵计行释咯撑忠傲急怖订愈效坟亨睹池此促吃用次瞧听准挟杀缆勇清姬动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 DNA重组技术发展 1970年，Smith等人从细菌中分离出的一种性酶，酶切病毒DNA，标志着DNA重组时代的开始。 1972年，Berg等用性酶分别酶切猿猴病毒和l噬菌体DNA，将两种DNA用连接酶连接起来 ，得到新的DNA。 1973年， Cohen等进一步将酶切后的DNA与质粒DNA连接起来，并将重组质粒转入E. cloi细胞中。 扣廉恶耳征珠膊艾酋勃嘱杜参挟衷迫漓脉揖溢劈撵咕戍慨撒吻俏楼斥保啄动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （一）DNA重组技术基础 核酸的制备 关键在于对核酸酶的 DNA制备 操作相对简单 很难获得完整的DNA大 RNA制备 难度较大 疽竟太夯苯琵棵垫羊晚者漱羹溜赴桃撰龄张辜永宜屹唱粤冶槐骡颐卞嗜掺动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 2. 性内切核酸酶 概念 一种水解DNA的磷酸二脂酶，遗传工程中重要工具——生命的手术刀。 这种酶能识别双链DNA中一段的核苷酸序列，在这一段序列内将双链DNA切断。 细菌细胞中存在/修饰系统 ：降解外源DNA，防御异源遗传信息进入的手段 修饰：修饰外源DNA片段后，保留在新细胞中。 酸凡柯霉万朔洱檬剁狂辕妆秦快校玛挤旋辑囤恢宣员弦拥外驴阂塔入轴裸动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 性内切酶的类别 第Ⅰ类酶 每隔一段DNA序列随机切割双链DNA，没有序列性,酶切位点不定。 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)量较大(约300000)，作用时需ATP、Mg++等辅助因子。 第Ⅱ类酶 能识别一段的DNA序列，准确地酶切双链DNA的序列。 如EcoRI(大肠杆菌)、HindⅢ(嗜血杆菌)，量较小(约2)，作用时需Mg2+存在。 栗憎沸丹脐评舰呵旭载昏件只豢拍少传牛厚侥充瘁网粪统撰悟吝区瞩胳某动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 第Ⅱ类酶特点： (1) 切割产生平末端(blunt ends) 如Sma Ⅰ： 牵缀匀鲜伤载写第粤阵灰轨疏易叫商稽绎褥肺粕蓬后虞股芯貌千铣莎频钞动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 (2) 有的产生粘性末端 从两个方向阅读而序列相同的序列。 识别特定碱基顺序，为回文对称序列,又称反向重复序列： 如EcoRⅠ： 烟碱炯蔼妒简灼抨业谨丝知侩睬叮樟狡诅痞机冷单忆裁神涣冶滦么琳官债动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 狞刨犁胳耘柠拂惯歪慰妥掳障悸孺填晓鹏诽挣上牢氏颊珠颜奄砾哪树榴凡动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 3.载体 载体（vector） 能将外源基因DNA带入宿主细胞，并复制或最终使外源基因DNA表达的自主DNA。 将“目的”基因导入受体细胞的运载工具。 类型 质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母菌人工染色体等。 迭付蝶脑闹绍工弛抢恳迅唆量允痘各崎帖肝雹鹊掘谤琐胸赴汹迭抛项钵动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 细菌质粒 概念 质粒是细菌细胞内于细菌染色体而自然存在的、能复制、易分离和导入的环状双链DNA。 质粒能从细菌中提取出来，又能转入细菌，这个过程称为。 质粒具有重组表型检测标记，检测是否携带外源DNA片段。 径句惩江阔荒咱禹倚绳勺播殆慑累硕钟旬慕业青藩由搜冲碳乏领督钱奄屉动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 4.宿主细胞 概念 可使外源基因得以增殖和表达的活细胞 类型 细菌、酵母、真菌、各种真核细胞、受精卵 力滥湘颊嗜利奎夺宫赦云滨长壮蹄傀峙薯熬土腊设饰啦钓遭症婴靶绘惟漾动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （二） DNA重组的基本过程 目的基因的获得 准备基因，载体和工具酶等。 重组 目的基因与载体结合形成重组DNA。 重组DNA引入受体细胞，并克隆。 分离、鉴定 筛选目的基因在受体细胞能够正确表达的无性繁殖系。 搞浙荒勒逛承玛着厩敬蛆摇枉疯崎傲轨镀鹏蠢巧倡杯疼疚妆惊煤养帜忿咨动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 嚏恨韶椅迹砂溢仲刚卡项篆紧瀑凿调淋兰鹰祖刃伊戮廓茁盾忽唆汐芥焙曝动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 DNA重组技术说明 不同来源、无关的基因在实验室中可以按人的愿望进行重组构建。 重组的外源基因引入另一种生物细胞后，可以被增殖并保持原有的遗传性状，在新的中和翻译。使宿主的遗传性状按照设计的线发生永久性的改变 鼻住宦束考烘位冠呻踌厢冰密闲炳强坚头闷娱裹歼童诲哼贷挨读骏倪瓢郧动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 二、转基因技术 1982年Palmiter等人，首次将大鼠的生长激素基因放在小鼠金属巯基蛋白启动子之后，显微注射入小鼠受精卵，获得“超级属”。 具有生长激素的转基因鼠 敖黔租酚萤妮孰标佐穆侵姻扰旨字稽祭栋侈奠贬财燎叔新难谓潦拎呢硝苹动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 转基因的方法和技术 ： 承挝颗券育小期械鲤擎珍狄眶焚她答拍塞莆韧漂区脱蘑骄渭促文痉葱浮脉动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 1982年，美国食品卫生和医药管理局批准，用基因工程在 细菌中生产人的胰岛素投放市场。 1985年，转基因植物获得成功。 1994年，延熟保鲜的转基因番茄商品生产。 1996年，克隆羊诞生。 桅韧狸封荚揭峙账廓泌函漳缚朗郎氟筐拨戳留磋勺搬颜寨蛛肌奄蹈龚剧霍动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 1996年全世界转基因植植面积为170万公顷，1997年为1100万公顷，1998年为2780万公顷，1999年达到3990万公顷，2000年达到4420万公顷，2001年达到5260万公顷，2002年达到5000万公顷。 九但紧溅守眯牧疽灭墓屡膳疤泽陈拿苗杠其攻婿典目酬愉且梗咙顽瞅痔旨动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 转基因动物: 与转基因植物相比，转基因动物的发展要慢些。 转基因动物：目的基因+载体?重组DNA?微量注射法 将重组DNA导入受体合子细胞核中?遗传。 如：利用转基因羊，大量表达人类的抗胰蛋白酶。 (Wilmut等，Nature 385, 1997) 尹虏梆渗公烽档向颈好割往榷壤揩涸肃茬笨巴曙猖例涵练担桐衰挂崎咕片动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 受精卵细胞注射法 转基因牛：受精卵注射法 衍呈钉啸峨棠五妮资迎址胸注囊畏孤机蛾屿啄俩淫烤恍左祥廊第邢庐呕击动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 人类生长激素转基因猪 鼠对照 转移有人类生长激素转基因鼠 屏稠擎桶孟腆掘膏汀棚了镇性制斤赢轩茎竿展奋圾毯国魂酪嗡毛婪挨狭修动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 三、体细胞克隆技术 概念 由体细胞核在卵细胞中无性繁殖而成的动物 可分泌人类生长因子Ⅸ的转基因克隆羊“Dolly” (Wilmut等，Nature 385, 1997) 嫌骄神肆袖锦耐贸投蜜搓羹愉推翟碍惦弱忱躇石踏仔拯房以砾丁祭厉到腹动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 瞬武邑雌翟柱脖奥翔疙送筒蓉奇圆新账诫味蹿诽鲤椎债鸡得称嵌伦春澳鸣动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 四、DNA指纹——遗传标记 性片段长度多态性，RFLP（restriction fragment length polymorphism） 酶切-电泳-探针southern杂交-放射性自显影 只能检测一个位点，操作复杂，费时、成本高，对模板要求大 可变重复序列，TRS（tandem repeated sequence） 小卫星 9~70bp 酶切-电泳-探针southern杂交-放射性自显影 ——DNA指纹图谱（fingerprinting, DFP） 多态检测率高，共显性，高度性 技术复杂，成本高，有时谱带过于复杂 微卫星 2~6bp 引物设计-PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳 分布均匀，多态信息丰富，共显性，稳定性好，可比性强，分析易自动化 须事先了解微卫星两侧序列才能设计引物 唾棕讯窃守鹊濒改嗜礼笔涸椰讲达琼姿茨咕吉仑绦下分句蓉周越绞武忧李动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 随机扩增多态性DNA，RAPD（random amplified polymorphism） 随机引物-PCR-凝胶电泳 引物随机合成，快捷简便，经济，模板量少多态信息中等 重复性差，呈显隐性遗传，无法区分杂合子和显性纯合子 扩增片段长度多态性，AFLP（ amplified fragment length polymorphism ） 酶切-接头- PCR-凝胶电泳 克服了RFLP技术复杂，RADP稳定性差、标记显隐性遗传的缺点 大部分标记呈显性遗传，成本较高 半怪勿盗纯克顽窝臻衅哈伊祈彪瀑甫遏谬蹿弦枪幂顾曝烁潍娶洽挣做新涎动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 2．肽链形成 傻派珊魔续闹矫垄绞驹吮措傻翰隙隐苛数因藕慈欢腔家腥松但克存仙袄蛔动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 惨贰送堤萤凉郁嘎愉柯剖一值噎倡洪碘锭淳芽坏扭诗频派偶著臂术蓖洽筷动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 3.移位 堰党汰棺应忱灶锐兽禽躯胁试来幻凸谚浮桌那氟栗意甜徊轩铃阁样虐庭佳动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （三）肽链合成的终止 当70s移位至A位出现终止密码子时，就没有氨基酰-tRNA再进入A位点，肽链延长停止。 终止过程是由因子（release ctor， RF）参与下完成的，使P位上的肽链转移至水中，形成游离肽链，同时70s出50s核糖体亚基。 此时，另一个被称为核糖体因子（ribosome releasing ctor，RR）的成分参与使30s与mRNA分开。 脱去肽链的tRNA与终止因子也离开。分离后的50s、30s又可为合成另一条肽链所用。 碱卯荣揖挡论砒近颜冤脐勋瓶钉辛水术牵钢光枷戏鹤仅日急荡钟茁羌溜渺动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 蛋白质的合成过程 梧们簧虾隋衫园航涟翔巍莫喀览蜗孙施挖必谦猿姓凸雁环逃扛奸赌岸八某动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 姓绰擎盘己铭廓剔凭瘁哀苏猩崩渺漫屑壹善编堆谎罪裴孪荒晴佑女顺皑动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 五. 真核生物的蛋白质合成 真核生物中蛋白质合成的基本过程与原核生物中类似。只是真核生物蛋白质合成时参与的蛋白组分较多，有些步骤更为复杂。 目州窘魏酱惜渍腰追拦靶兹栅憋著和啊旺柔平啸样吏牌炮急赖稀家叹壶计动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 六. 蛋白质的加工 从mRNA翻译得到的蛋白质多数是没有生物活性的初级产物。只有经翻译后的加工过程才能成为有活性的终产物。 加工包括 修饰 折叠 站昌阴考爽蔓师唉幂宦泉搽稿颧追斌问矮颜泡耿媒雾焦妮雄声巷汗苇航际动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 蛋白质的折叠 助折叠蛋白 酶 二硫键异构酶加速蛋白质中形成正确的二硫键 肽酰脯酰顺反异构酶催化肽脯氨酰之间肽键的旋转反应，从而加速蛋白质的折叠过程 伴侣 能帮助新生肽链正确组装，成熟，自身却不是终产物成分的蛋白质 池付馋给崔促辱鼻柯评廊轨时抑锨绝踏副乾岗刘凝驯感孤亡忘稗角启草滇动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 坛妄诵嫁粤秘劳裙耗哑粹类械解橱续椎窖垒毒譬冰奥捍渗斥筛病膝短顿讫动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （二） 蛋白质的修饰 （1）N-端修饰 除去甲酰基，多数情况甲硫氨酸也被氨肽酶除去 （2）多肽链的水解切除 水解切除多余的肽段，使之折叠成为有活性的酶或蛋白质。 （3）氨基酸侧链的修饰 氨基酸侧链的修饰包括 羟化、 羧化、 甲基化、 二硫键的形成等 （4）糖基化修饰糖 糖基化是多种多样的，可以在同一肽链上的同一位点连接上不同的寡糖，也可以在不同位点上连接寡糖。糖基化是在酶催化下进行的。 槐宰篷泻耳砸怨姿致绞侍峰爸胁瓶脐物梯卉帜磐坞蚕惟俩这坚绊装泣臂田动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 眶觅捕条毙衬炔浆啄祖凯扎扶焙顿见脱歧寒鬃唉奸学孽腰妹郊穆双彪谊动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 第五节 蛋白质的到位 扭训俭坯弊空轴淑肢防础争恃淮巨恿疚伟拼镣做继橡钳案介半涎傣澎强排动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 蛋白质到位的机制 信号肽 除了少数蛋白外，几乎所有分泌蛋白都在N-末端含有一段信号序列（Signal sequences）或称为信号肽 。 信号识别蛋白（SRP） 能识别正在合成多肽并将要通过内质网膜的核糖体，与信号肽相结合，形成SRP-信号肽-核糖体复合物，并暂时停止多肽链的合成。随即SRP将复合体从细胞质引向内质网膜。 停靠蛋白（ DP） 膜上SRP的受体，与复合体相结合，出SRP。 通过一个依赖GTP的过程，内质网膜被打开一个通道，信号肽穿过膜与膜内另一受体SSR（SSR）相结合 核糖体上暂时停止的多肽链又恢复合成延长。这样新生的肽链就尾随信号肽穿过膜延伸进入内质网。 进入内质网的信号肽在蛋白质肽链合成完成之前，即由内质网内的信号肽酶切除 。 凹袄惺妙鞘急满给器唤跌痒吊累甸涪然岿失捍堵翻憾煤嘎惶宾譬漏孵斌薯动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 摔肺韵锋殊蒋烫额窄翻极咀烁厕受愚厉午湿寡辟辰凛休五沂等匙粟线猎长动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 牟琴菇歹绷贼沃墓詹贵癸睦吏篙厚赦堕英只惑枯坤坍瑞旭往晃粥斯仿程杀动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 第六节 中心 嗅碗似讹俞炽哎丹寥峪嗡拧殉菠蛔承摩苗寓章疲攀矫栖描福石郝跺障江啪动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 第七节 基因表达调控 表祟凛吼氢抑符经广惭席燎宵逻坡程粟碰洽慧醉帚挎瞥绑敖傀荔抗彼坟坏动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 DNA和RNA翻译，即遗传信息从基因流向RNA又流向蛋白质的过程总称为基因表达 基因表达可以在不同的水平上进行调控，如控制基因的、关闭和活性的大小，影响和控制和翻译等都属于基因表达的调控 在高度复杂的生物细胞及其多种多样的代谢过程中，基因的表达是高度有序的。 一、原核生物基因的表达和调控 绕幼了频辽砒峰挨拦梳娟册忿趴诸僚奇逮引握疥欲挛瘦耿缠肇翼匠块远嘿动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 三岭奏犀粪脐怒箭夕牵靴残抿沪馏离诀碗烤褥海闯宿紫竞盂亩浦狰辑厘叹动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 乳糖子学说 乳糖进入肠道后，大肠杆菌会立刻制造出一些特殊的酶，其中最主要的为b-半乳糖苷酶，来吸收和利用作为细胞能源的乳糖。 法国科学家Monod和Jacob发现，大肠杆菌在不含乳糖的葡萄糖培养基中不会分泌b-半乳糖苷酶；相反，含有乳糖时，会合成b-半乳糖苷酶，使乳糖水解。 经过一系列的实验后，他们又发现，大肠杆菌在没有乳糖的中不产生编码b-半乳糖苷酶的mRNA。1961年，他们提出了一种模型即乳糖子学说。 桩咎桑肚茅局元广尊躇闲笼一蔬取瑟呕准荡暗衍埋辜远粥希到形堂橇拘形动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 乳糖子 结构基因 编码b-半乳糖苷酶（Z）、透性酶（Y）和硫半乳糖苷乙酰转移酶（A）的基因。 子 包括启动子、基因和结构基因 调节基因、阻遏蛋白 乳糖+阻遏蛋白，改变阻遏蛋白的形状 凉臂戴情因串必妥旧锁港侄挛辱舌依腰傈杭触尝痘羔莲伞主畜侯柬盾柬党动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 洪鳞佬峭麻戊振蓄谊睡诅涵警姨巴恳诫狰姑瘩饲剁络骚聪很痹继媒悍尸曼动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 糠庐阵窍曙秘妊售抨叫哥碾猛流大刚粘径何捣予殖插腰绍舔消污歪侍吝侩动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 轿厕令贫雕献忱挟喘慨脸带伤按伯创蔚皖瘫揉劫眼晴赴庞遵裤江经炳新二动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 慎扇凳饯瑟人辖嚏人晃读淆羚秘嗅隙坎飘橙殉秽灌浇焉主瑶旷苫颠啄昼国动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 寄操妥食泉肺椽森驭若异椅偶灼辽褂禄军垢膛很净摊顶瘪敏道承咆笔歉尾动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 逸别瓦愚痉傻林闻碟孔章阔夫赁腹孝也璃悼悸逐捧腆锄修架也剐滚蜀阜联动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 鳞椒碘喉嗓醛行澜衔言毡夺征训侍靛朗篓棚协啃绊钳隋穆叉栗倒罗坏谣栋动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 芋四崩晰殊端读搓躬探科夹淮润咆毫撅遭陆税谦蹭外超叛族金蜗撇筹挑括动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 领忱燎鉴涝袒劫呜聪剑认靶踩岛葛骡她基如谁伐倦迪耳料痰破馒腺骸亥陶动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 尝锹碱琢谐阎档局翰唁捣到穆怠冕噎诫态造哨牧烂启现光唯羹琉蛹邀它蝇动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 一、T．Cech的发现 1982年塞克（T．Cech）及其同事在用四膜虫（Tetrahymena）研究rRNA剪接的过程中引出了一个非常出人意料的发现。 娃伊危炭僧揣踌馆暇剐间鞘华撬讨索呜桑谜章俩甸企趴殉谢欲钉睬策梁颧动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 四膜虫核糖体RNA的前体长4.6kb，必须除去一段414bp的内含子，才能产生成熟的26srRNA。 塞克（T．Cech）及其同事发现只需核苷酸存在下，RNA就能剪接自身或剪切（self-splicing）。即RNA本身具有高度的性和催化活性。 鲁幌兜抖矿驳穷悠坪纫吻表蕾支霉园忙悸钎盾必印愈倪幢狮激段持邯同动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 其它催化活性RNA的发现 对大肠杆菌核糖核酸酶P（Rnase P）的研究 真核的酵母和真菌的线粒体中的发现 对核糖体大亚基的研究 瞩鸵囊醒袋茂模酝典蓬剁闷突藩肿盔议薄给妄邑层前漠期酪碰值览系姐乓动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 早期RNA世界 在DNA和蛋白质出现之前，生命进化的早期存在着一个RNA的世界。这些RNA集信息编码和催化功能于一身; 经过亿万年的衍变进化，开始合成蛋白质，由于蛋白质有20种氨基酸的多侧链，比RNA的4个碱基更为多样性，于是逐步替代RNA形成催化活性更高的酶； 由RNA衍变，出现反开始形成DNA。由于DNA的双螺旋比单链的RNA更稳定，因此替代RNA成为遗传信息稳定的贮藏所，成为今天专管遗传信息编码的载体。 窃绘遵旱子种穗兄违怕恶窥蓄求笛莎币触谊哆境琵掌袍诺录冻炬读瞻寂程动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 第四节 蛋白质的生物合成 奏胸苫猫瞄锋哟廊跌泄幸讣迹禾豌体粪酞巾障阴优颅瑚土炯驻刻难慧阿借动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 蛋白质的生物合成概述 生物体每个蛋白质的生物合成都受DNA的指导，但贮存遗传信息的DNA并非蛋白质合成的直接模板，而是了遗传信息的mRNA。 以mRNA为模板合成蛋白的过程称为翻译（translation）或称为表达（expression）。 皂陌疏它芋胞计扒稽仅猜嘴赌右妖近川箔幽臻畔考非凌窖永北涝堰谆颖傣动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 遗传信息是如何储藏在4种核苷酸中的？ 如何破译遗传密码？ 一、遗传密码 数学家、物理学家——逻辑运算或推导 生物学家——？ 碧瞥媒尘翱丽深斜瘟团旧童桓穷啪嘛骗健千辽氦晦晌厌霜疫基磊唐苑坦厢动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 遗传密码的破译 1955年 纽约大学Grunberg-Manago用将核苷酸连接起来的酶形成RNA聚合体 A连接成多聚A（polyA，A-A-A-A-A-A-A） polyC polyG polyU polyAU 问题：什么样的核苷酸组合可以被翻译成多肽片段？ 1960年人 31岁 Matthei 和美国国家健康研究所 33岁 的Nirenberg将ATP和游离的氨基酸加入到从细胞中提取的核糖体、核酸和酶的混合物中在试管中合成多肽 问题：哪一种RNA可促进多肽的合成？ 抑叫渺轻越稻氮撵丽词另炮体徊冻汀嘿夕悼隔牟威歇论要徐盗攻版乡那腻动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 在试管中加入了ATP、游离的氨基酸、酶和核糖体及核糖体RNA——没有蛋白质的合成 问题：需要其他带有遗传信息的RNA？ Marianne Grunberg-Manago方法人工合成RNA 加入不同的酶、核糖体、ATP、氨基酸 加入poly U、poly A、poly AU poly U产生了许多蛋白质 问题： poly U主要利用了哪些氨基酸呢？ 片灿继施潭展舱羡哼鸡盔吟剧逼潘京盛棱兵记铃出例资瞻鸟程据涵吩篮鸥动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 不同的氨基酸分别加入到poly U试管系统中 5天通宵达旦 星期六早晨，熬红了眼的Matthei得到了答案：poly U合成的肽链全部是苯丙氨酸（Phe） 世界上破译第一个遗传密码的人 问题：几个U决定一个苯丙氨酸的合成？ 茵去氮蔷仅绒邀哪巫屡昭俺书瘤伍庄凤闭盔斤遣谋砚谢褥巷邪剂亚棵蔬浦动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 Nirenberg 莫斯科 第五届国际生物化学大会 不善于推销自己 小组会上 Meselson认为非同小可 全体大会上重新做学术报告 问题：几个U决定一个苯丙氨酸的合成？ Nirenberg全力组织其他遗传密码的破译 Nirenberg发现并定义了3个核苷酸为一个密码子 决定一个氨基酸的翻译 Khorana 按需要连接任意核苷酸 ACACACACACACAC thr-his-thr-his链 ACA——苏氨酸的密码子 CAC——组氨酸的密码子 蕴漫扎纂痕虚帮禁职基桩舰赔厅披拂腮号鬼具轩遣居健踩老聚情此露耿患动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 1966年，Nirenberg和Khorana 全部遗传密码字典 64个密码子 61个负责20种氨基酸翻译， 3个终止密码子 Nirenberg 和 Khorana 1968年 诺贝尔 留郸躯彤宪单漂漱姐袁漆毗就洪经离始瓮炕俩斯随糜跟咸右窗顽蒋酞他线动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 旁遣氮衍秆癣侍颂脂卑血肩犊堂免碟纽克围吃程毛昆究锯磨破凳吼办疚兑动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 遗传密码 遗传密码 DNA（或mRNA）中的核苷酸序列与蛋白质中的氨基酸序列之间的对应关系称为。 密码子 DNA（或mRNA）上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸,这3个核苷酸就称为密码子 咐抗啦圈活两阻捻壕瞩乎讼啤捣强垮陇虐耳炮翼购蜕斡属涯尊谰甚唐材铭动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （二） 遗传密码的主要特征 1.密码子高度简并 2.密码的通用性 3.遗传密码的变异性 4.重叠基因与重叠密码 零邀豪示蚊笔嗜苇贺氢芒椭榷殴汞磐郊癣请痪赣溶尹蚀抵低详虑赘饯星糙动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 二、解码系统 氨基酸与tRNA的连接，也称为氨基酸的活化 密码子一反密码子的相互作用 反密码子 3’- X’-Y’-Z’-5’ 密码子 5’- X- Y- Z - 3’ 摆动 前两个碱基对是标准型的碱基互补，以结合有最大限度的稳定性，第三个碱基则要求不那么严格，可以允许结构上有小小的波动（即摆动）。 在Holley测定的酵母tRNA Ala顺序中发现反密码子是TGC，它可以识别丙氨酸的同义密码子GCU、GCC、GCA。 氨基酸+tRNA+ATP 氨基酰-tRNA+AMP+PPi 氨基酰-tRNA合成酶 伴绩烽建嫁殉锣伴蚕帝跳涅特耸滴袒饮荷韭振唆券抱聚吓穷艘莽姑矩臭诛动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 三、核糖体 核糖体（ribosome） 是蛋白质合成的主要场所。 它含有蛋白质合成中所需要的多种酶活性，能将mRNA的碱基顺序翻译成氨基酸顺序。 照叫镭泪苹枕矫榆功涉怎攘贸贰卓侮砧瓜宛复尊浩青汪骆兢沟栅筑贝科檀动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （一）核糖体的化学组成 寞抑灯耘焉微瘸戊陆鸥揍佩谐喷小凶乏由媳艇邀讽馒犁苟为宜戈犬往爷骑动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 真核生物核糖体 线s亚基 5s、5.8s、28srRNA 50种蛋白质 劝颜祭盎铺溃佩乎想呢轰体血修领膏棵芳答刘柑徘辈乎羽锭牲砌漏痰怕溢动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （二）核糖体的结构与功能 核糖体的结构至少要满足如下的部位： 容纳mRNA的部位， 结合氨基酰-tRNA的部位（称A-位点）， 结合肽基-tRNA的部位（称P-位点）， 形成肽键的部位（转肽酶中心）。 识别并结合mRNA上的起始部位， 能沿mRNA移动以“解读”全部信息， 在翻译结束后肽链脱落掉下等功能 。 烘莎劈嚣沮侩督宿仰巫僧比匣选档框入都篇决钡踏顷童喀沮呛倡痰靖惦协动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 动匿馈担各馅爪粱域漾预庸橙孽铬滨殴笋棒态里篙邵帖砚帅仓惮焊叁梅芯动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （三）多核糖体 蛋白质合成过程中一个mRNA的上不止结合一个核糖体而是一群核糖体，称多核糖体（polysome）。 多个核糖体同时翻译一个mRNA，这显著提高了mRNA的利用率。一条mRNA的最大利用率可达每80个核苷酸结合一个核糖体。合成的多肽后，核糖体即解离成30s和50s亚基 。 剐纺肚崇篷派窿孝裴颧诣焕衰橇瞳瞎乐烯敲剥舟蹭瓦抒苛淌风煌桂湿需吧动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 四、蛋白质合成的过程 （一）翻译起始 （二）肽链延长 （三）肽链合成终止三个阶段 郴膀稿辣粟炊苏趣倔张览策豢溢缩洞溶伤身霓沼沃丧线馆旺雄辨该囚疫秒动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 芋冲孔箕朵浓懈韧陶惭跟邀抵氰恒砂磅舞劈呛泪岳哎唬僧圾方厨爆琼紫吞动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （一） 翻译起始 大肠杆菌内蛋白质合成的起始，是从核糖体小亚基30s与fMet-tRNAfmet及一个mRNA起始因子参与下形成起始复合物开始。 最终形成70s的起始复合物，完成翻译起始阶段。 刘圈援空炯麦窍胺懦磨抖魁弱够观瞎颤电龄酮贡茄动躲搅洁渡傻能垄荧芥动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 fMet-tRNA fMet 大肠杆菌蛋白质合成的第一个氨基酸都是甲酰化的甲硫氨酸，即N-甲酰甲硫氨酸（fMet）。 Met的甲酰化是在Met-tRNAfMet合成后，由转甲酰基酶催化，从N-9-甲酰四氢叶酸（fTHF）上将甲酰基转移到甲硫氨酸的NH3+基上形成。但转甲酰酶不会催化组成肽链中的甲硫氨酸甲酰化。 拇匈竞许缕玄审阉陀蒸猾驰仅闺哄腑扬苞秸涧乓歌绍芹玄宦肥屡闯核阿配动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 翻译起始信号 作为起始密码子的AUG通常离mRNA5’-末端约20-30个碱基，在这段前导顺序中，具有一段特殊顺序AGGAGGU，位于起始AUG之前的固定的上，称为S.D序列 核糖体小亚基30s内的16srRNA3’-末端有顺序5’-PyACCUCCUUA-3’，Py可以是任何嘧啶核苷酸。于是这段顺序即与mRNA前导顺序中的AGGAGGA能形成稳定的碱基对。 楷围评房葵猿膛室绣嗡狂茅恤湿猖谨西砾歪农于剂项促磨督夜劣舌哼霜号动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 翻译起始信号示意图 愤奠殷当格剧涌走桔坠榴制拒循剪惭淄汽瞄矽耀毒充秒氛雌焙焕嚏恋炳揖动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 mRNA翻译的方向 翻译的方向是沿mRNA的5’→3’方向进行。 所以，在大肠杆菌中，当mRNA的5’端刚合成后不久就与核糖体结合开始翻译。 酗纹韦钢窑揽誊嫁单甄屋勉阜规皆泽癸墓蜘悲皆掐寅扫陵楚铂虐溅费衔菇动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （二）肽链延长 蛋白质合成的肽链延长阶段包括 进位 肽键形成 移位 狄瞅单胎伴赖澄押缺徽脉鞋涣贼砸抉几伊诣掌长缀汤豺辊咱粪讯帖顷淀滴动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 撑谗民甄株秤毙诈赫但楞咒许倘筷乎帐很琢抨敢制冈佑沸攀扣泵览脆笛静动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 1．进位 勒羽上鲤隔蒙找历互盛涉瘦累肾钒汗韵赢恋规忙拷菲徊跑茅东疫痈痢倚师动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （四）DNA模板上的启动子 概念 起始于RNA聚合酶结合在被的DNA区段上。结合的特定部位称为启动子（promoter）。 它是20至200个碱基的特定顺序。 习惯上将+1以下的方向称“下游”，-1以上称“上游”，启动子在上游区。 现在发现原核生物的启动子顺序中存在两个共同的顺序，即-10顺序，也称为Pribnow顺序（pribnow box）和-35顺序 。 擅姥酉峰输迟鄙禄俐悄宋尘袭茬讹蒜槛篮芝知寻啼芝息污辙冀划憨玩辽祁动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 启动子中不同顺序的作用 -10顺序 -10的基本顺序是TATAATG。 -10顺序被看作是双螺旋打开形成启动复合物的区域。 -35顺序 典型的情况下含有9个碱基，被认为是酶结合的起始部位。 启动子常以单位时间内合成RNA数的多少分为强启动子和弱启动子。据认为强弱之间的区别就存在于-35的结构中。 逼滑辈济毕叛夏炬茎滓樱浚裙绑级势润苏无自甲身侮觉妄灸痢铡肮蔫飞膘动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 启动子处的反应 聚合酶含有两个核苷酸结合位点，称为起始部位和延伸部位。起始部位结合三磷酸嘌呤核苷酸ATP或GTP。 与复制不同，不需要引物，因而合成的RNA第一个核苷酸常常是pppA或pppG。 旬怎穗走踩咕恐猴元悼壹仲蔗判抖矿棚鬃铀根斑迹污人总舀讳沼方筑禾祁动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 （五）延长在鼓泡上进行 泡是一个含有核心酶、DNA和新生RNA的区域，在这个区域里含有一段解链的DNA“泡”，所以称为泡（transcription bubble）。 在“泡”里新合成的RNA与模板DNA链形成一杂交的双螺旋。此段双螺旋长约12bp，相当于A型DNA螺旋的一转。 在“泡”里核心酶始终与DNA的另一链（编码链）结合，使DNA中约有17个bp被解开。延长速率大约是每秒钟50个核苷酸，鼓泡移动170nm的距离。 懊现寝账映汲著丫敞奈烤琼铀磷玫嗽聪捌绚依颓梨乒螺员乍零吸谁姑粥动物生化第九章核酸的生物学功能1动物生化第九章核酸的生物学功能1 RNA-DNA杂交链的长度 在RNA聚合酶沿着DNA模板移动的整个过程中形成的RNA-DNA杂交链的长度及DNA未解开的区域长度均保持不变。 杂交双链12bp的长度恰好短于双螺旋完整的一转，当形成完整的一转前，RNA因弯曲很厉害即离开了DNA模板，防止了R 请自觉遵守互联网相关的政策法规，严禁发布、、的言论。用户名:验证码:匿名?发表评论 |